1. Účel: Cieľom tohto postupu je poskytnúť štandardizovaný postup pre aseptické operácie a ochranu sterilných miestností.
2. Rozsah pôsobnosti: biologické testovacie laboratórium
3. Zodpovedná osoba: Vedúci tester kontroly kvality
4. Definícia: Žiadna
5. Bezpečnostné opatrenia
Prísne vykonávajte aseptické operácie, aby ste predišli mikrobiálnej kontaminácii; operátori by mali pred vstupom do sterilnej miestnosti vypnúť UV lampu.
6. Postupy
6.1. Sterilná miestnosť by mala byť vybavená sterilnou operačnou sálou a vyrovnávacou miestnosťou. Čistota sterilnej operačnej miestnosti by mala dosahovať triedu 10000. Vnútorná teplota by sa mala udržiavať na úrovni 20 – 24 °C a vlhkosť by sa mala udržiavať na úrovni 45 – 60 %. Čistota čistého laboratórneho stola by mala dosahovať triedu 100.
6.2 Sterilná miestnosť by sa mala udržiavať v čistote a je prísne zakázané hromadiť odpadky, aby sa zabránilo kontaminácii.
6.3. Prísne zabráňte kontaminácii všetkých sterilizačných zariadení a kultivačných médií. Tí, ktorí sú kontaminovaní, by ich mali prestať používať.
6.4. Sterilná miestnosť by mala byť vybavená dezinfekčnými prostriedkami v pracovnej koncentrácii, ako je 5 % roztok krezolu, 70 % alkohol, 0,1 % roztok chlórmetionínu atď.
6.5. Sterilná miestnosť by sa mala pravidelne sterilizovať a čistiť vhodným dezinfekčným prostriedkom, aby sa zabezpečilo, že čistota sterilnej miestnosti spĺňa požiadavky.
6.6. Všetky nástroje, pomôcky, riad a iné predmety, ktoré je potrebné priniesť do sterilnej miestnosti, by mali byť pevne zabalené a sterilizované vhodnými metódami.
6.7. Pred vstupom do sterilnej miestnosti si personál musí umyť ruky mydlom alebo dezinfekčným prostriedkom a potom sa v tlmivej miestnosti prezliecť do špeciálneho pracovného oblečenia, obuvi, prilby, rúšok a rukavíc (alebo si pred vstupom do sterilnej miestnosti znova utrieť ruky 70 % etanolom). Operácie vykonávať v bakteriálnej komore.
6.8. Pred použitím sterilnej miestnosti musí byť zapnutá ultrafialová lampa v sterilnej miestnosti na ožarovanie a sterilizáciu na viac ako 30 minút a zároveň musí byť zapnutý čistý stôl na fúkanie vzduchu. Po dokončení operácie by sa mala sterilná miestnosť včas vyčistiť a potom sterilizovať ultrafialovým svetlom na 20 minút.
6.9. Pred kontrolou by mal byť vonkajší obal testovanej vzorky udržiavaný neporušený a nesmie sa otvárať, aby sa zabránilo kontaminácii. Pred kontrolou dezinfikujte vonkajší povrch vatovými tampónmi so 70 % alkoholom.
6.10. Počas každej operácie by sa mala vykonať negatívna kontrola na overenie spoľahlivosti aseptickej operácie.
6.11. Pri nasávaní bakteriálnej tekutiny musíte použiť saciu guľôčku. Nedotýkajte sa slamky priamo ústami.
6.12. Inokulačná ihla sa musí sterilizovať plameňom pred a po každom použití. Po ochladení sa môže kultúra inokulovať.
6.13. Slamky, skúmavky, Petriho misky a iné pomôcky obsahujúce bakteriálnu tekutinu by sa mali na dezinfekciu namočiť do sterilizačného vedra s 5 % roztokom lyzolu a po 24 hodinách vybrať a opláchnuť.
6.14. Ak sa na stole alebo podlahe rozliala bakteriálna tekutina, mali by ste pred ošetrením okamžite na kontaminovanú oblasť naliať 5 % roztok kyseliny karbolovej alebo 3 % Lysol a pôsobiť na ňu aspoň 30 minút. Ak sú pracovné odevy a klobúky kontaminované bakteriálnou tekutinou, mali by sa po sterilizácii vysokotlakovou parou okamžite vyzliecť a vyprať.
6.15. Všetky predmety obsahujúce živé baktérie musia byť pred opláchnutím pod tečúcou vodou dezinfikované. Znečisťovanie kanalizácie je prísne zakázané.
6.16. Počet kolónií v sterilnej miestnosti by sa mal kontrolovať mesačne. S otvoreným čistým stolom vezmite niekoľko sterilných Petriho misiek s vnútorným priemerom 90 mm a asepticky vstreknite približne 15 ml živného agarového kultivačného média, ktoré bolo roztavené a ochladené na približne 45 °C. Po stuhnutí ich otočte hore dnom pri teplote 30 až 35 °C. Inkubujte 48 hodín v inkubátore pri teplote 30 až 35 °C. Po preukázaní sterility vezmite 3 až 5 platní a umiestnite ich na ľavú, strednú a pravú stranu pracovnej polohy. Po otvorení veka a ich vystavení na 30 minút ich umiestnite hore dnom do inkubátora pri teplote 30 až 35 °C na 48 hodín a vyberte ich. Skontrolujte. Priemerný počet rôznych baktérií na platni v čistej oblasti triedy 100 nesmie prekročiť 1 kolóniu a priemerný počet v čistej miestnosti triedy 10 000 nesmie prekročiť 3 kolónie. Ak sa prekročí limit, sterilná miestnosť by sa mala dôkladne dezinfikovať, kým opakované kontroly nespĺňajú požiadavky.
7. Pozrite si kapitolu (Metóda kontroly sterility) v častiach „Metódy kontroly hygieny liekov“ a „Čínske štandardné operačné postupy pre kontrolu liekov“.
8. Oddelenie distribúcie: Oddelenie riadenia kvality
Technické pokyny pre čisté priestory:
Po dosiahnutí sterilného prostredia a sterilných materiálov musíme udržiavať sterilný stav, aby sme mohli študovať špecifický známy mikroorganizmus alebo využívať jeho funkcie. V opačnom prípade sa môžu ľahko primiešať rôzne mikroorganizmy zvonku. Fenomén primiešavania irelevantných mikroorganizmov zvonku sa v mikrobiológii nazýva kontaminujúce baktérie. Prevencia kontaminácie je kritickou technikou v mikrobiologickej práci. Úplná sterilizácia na jednej strane a prevencia kontaminácie na strane druhej sú dva aspekty aseptickej techniky. Okrem toho musíme zabrániť úniku študovaných mikroorganizmov, najmä patogénnych mikroorganizmov alebo geneticky modifikovaných mikroorganizmov, ktoré v prírode neexistujú, z našich experimentálnych nádob do vonkajšieho prostredia. Na tieto účely existuje v mikrobiológii mnoho opatrení.
Sterilná miestnosť je zvyčajne malá miestnosť špeciálne zriadená v mikrobiologickom laboratóriu. Môže byť postavená z plachiet a skla. Priestor by nemal byť príliš veľký, približne 4-5 metrov štvorcových a výška by mala byť približne 2,5 metra. Mimo sterilnej miestnosti by mala byť zriadená vyrovnávacia miestnosť. Dvere vyrovnávacej miestnosti a dvere sterilnej miestnosti by nemali smerovať rovnakým smerom, aby sa zabránilo prúdeniu vzduchu a vnášaniu rôznych baktérií. Sterilná miestnosť aj vyrovnávacia miestnosť musia byť vzduchotesné. Vnútorné vetracie zariadenie musí mať zariadenia na filtráciu vzduchu. Podlaha a steny sterilnej miestnosti musia byť hladké, odolné voči nečistotám a ľahko čistiteľné. Pracovný povrch by mal byť rovný. Sterilná miestnosť aj vyrovnávacia miestnosť sú vybavené ultrafialovými svetlami. Ultrafialové svetlá v sterilnej miestnosti sú vzdialené 1 meter od pracovného povrchu. Personál vstupujúci do sterilnej miestnosti by mal nosiť sterilizované oblečenie a prilby.
V súčasnosti sa sterilné miestnosti nachádzajú najmä v mikrobiologických továrňach, zatiaľ čo bežné laboratóriá používajú čisté laboratórne stoly. Hlavnou funkciou čistých laboratórnych stolov je použitie laminárneho zariadenia na prúdenie vzduchu na odstránenie rôznych drobných častíc prachu vrátane mikroorganizmov z pracovného povrchu. Elektrické zariadenie umožňuje prechod vzduchu cez HEPA filter a následný vstup na pracovný povrch, takže pracovný povrch je neustále pod kontrolou prúdiaceho sterilného vzduchu. Okrem toho je na strane blízko vonkajšej strany umiestnená vysokorýchlostná vzduchová clona, ktorá zabraňuje vstupu vonkajšieho bakteriálneho vzduchu.
V miestach s náročnými podmienkami je možné namiesto čistého stola použiť aj drevené sterilné boxy. Sterilný box má jednoduchú konštrukciu a ľahko sa premiestňuje. Na prednej strane boxu sú dva otvory, ktoré sú v nefunkčnom stave blokované dvierkami typu push-pull. Počas prevádzky môžete doň natiahnuť ruky. Horná časť prednej časti je vybavená sklom pre uľahčenie vnútornej prevádzky. Vo vnútri boxu sa nachádza ultrafialová lampa a cez malé dvierka na boku je možné vkladať náradie a baktérie.
Aseptické operačné techniky v súčasnosti zohrávajú nielen kľúčovú úlohu v mikrobiologickom výskume a aplikáciách, ale sú tiež široko používané v mnohých biotechnológiách. Napríklad transgénna technológia, technológia monoklonálnych protilátok atď.
Čas uverejnenia: 06.03.2024