1. Účel: Cieľom tohto postupu je poskytnúť štandardizovaný postup pre aseptické operácie a ochranu sterilných miestností.
2. Rozsah použitia: biologické testovacie laboratórium
3. Zodpovedná osoba: Kontrolór kontroly kvality
4.Definícia: Žiadne
5. Bezpečnostné opatrenia
Prísne vykonávať aseptické operácie, aby sa zabránilo mikrobiálnej kontaminácii;operátori by mali pred vstupom do sterilnej miestnosti vypnúť UV lampu.
6.Postupy
6.1.Sterilná miestnosť by mala byť vybavená sterilnou operačnou miestnosťou a vyrovnávacou miestnosťou.Čistota sterilnej operačnej miestnosti by mala dosahovať triedu 10000. Vnútorná teplota by mala byť udržiavaná na 20-24°C a vlhkosť 45-60%.Čistota čistej lavice by mala dosiahnuť triedu 100.
6.2.Sterilná miestnosť by mala byť udržiavaná v čistote a je prísne zakázané hromadiť nečistoty, aby sa zabránilo kontaminácii.
6.3.Dôsledne zabráňte kontaminácii všetkých sterilizačných zariadení a kultivačných médií.Tí, ktorí sú kontaminovaní, by ich mali prestať používať.
6.4.Sterilná miestnosť by mala byť vybavená dezinfekčnými prostriedkami s pracovnou koncentráciou, ako je 5% roztok krezolu, 70% alkohol, 0,1% roztok chlórmetionínu atď.
6.5.Sterilná miestnosť by sa mala pravidelne sterilizovať a čistiť vhodným dezinfekčným prostriedkom, aby sa zabezpečilo, že čistota sterilnej miestnosti spĺňa požiadavky.
6.6.Všetky nástroje, nástroje, riad a iné predmety, ktoré je potrebné preniesť do sterilnej miestnosti, by mali byť pevne zabalené a sterilizované vhodnými metódami.
6.7.Pred vstupom do sterilnej miestnosti si personál pred vstupom do sterilnej miestnosti musí umyť ruky mydlom alebo dezinfekčným prostriedkom a následne sa prezliecť do špeciálneho pracovného odevu, obuvi, čiapok, masiek a rukavíc (alebo si znova utrieť ruky 70% etanolom).Vykonávajte operácie v bakteriálnej komore.
6.8.Pred použitím sterilnej miestnosti je potrebné zapnúť ultrafialovú lampu v sterilnej miestnosti na ožarovanie a sterilizáciu na viac ako 30 minút a súčasne zapnúť čistú lavicu na fúkanie vzduchu.Po dokončení operácie je potrebné sterilnú miestnosť včas vyčistiť a potom sterilizovať ultrafialovým svetlom počas 20 minút.
6.9.Pred kontrolou by sa mal vonkajší obal testovanej vzorky zachovať neporušený a nesmie sa otvárať, aby sa zabránilo kontaminácii.Pred kontrolou použite 70% alkoholové vatové tampóny na dezinfekciu vonkajšieho povrchu.
6.10.Počas každej operácie by sa mala vykonať negatívna kontrola, aby sa skontrolovala spoľahlivosť aseptickej operácie.
6.11.Pri nasávaní bakteriálnej tekutiny musíte použiť saciu guľu, aby ste ju absorbovali.Nedotýkajte sa slamky priamo ústami.
6.12.Očkovacia ihla sa musí pred a po každom použití sterilizovať plameňom.Po ochladení sa kultúra môže naočkovať.
6.13.Slamky, skúmavky, Petriho misky a iné náčinie obsahujúce bakteriálnu tekutinu je potrebné na dezinfekciu namočiť do sterilizačného vedra s 5 % roztokom lyzolu a po 24 hodinách vybrať a opláchnuť.
6.14.Ak sa na stôl alebo podlahu rozliala bakteriálna tekutina, mali by ste kontaminovanú oblasť pred ošetrením okamžite naliať 5% roztokom kyseliny karbolovej alebo 3% lyzolu po dobu najmenej 30 minút.Ak sú pracovné odevy a klobúky kontaminované bakteriálnou tekutinou, mali by sa ihneď vyzliecť a po sterilizácii vysokotlakovou parou vyprať.
6.15.Všetky predmety obsahujúce živé baktérie sa musia pred opláchnutím pod tečúcou vodou dezinfikovať.Je prísne zakázané znečisťovať kanalizáciu.
6.16.Počet kolónií v sterilnej miestnosti by sa mal kontrolovať mesačne.S otvoreným čistým stolom vezmite niekoľko sterilných Petriho misiek s vnútorným priemerom 90 mm a asepticky vstreknite približne 15 ml živného agarového kultivačného média, ktoré bolo rozpustené a ochladené na približne 45 °C.Po stuhnutí ho postavte hore dnom pri teplote 30 až 35 °C. Inkubujte 48 hodín v inkubátore s teplotou ℃.Po preukázaní sterility odoberte 3 až 5 doštičiek a umiestnite ich vľavo, v strede a vpravo od pracovnej polohy.Po otvorení krytu a vystavení na 30 minút ich umiestnite hore dnom do inkubátora pri teplote 30 až 35 °C na 48 hodín a vyberte ich.skúmať.Priemerný počet rôznych baktérií na platni v čistom priestore triedy 100 nesmie presiahnuť 1 kolóniu a priemerný počet v čistej miestnosti triedy 10 000 nesmie presiahnuť 3 kolónie.Pri prekročení limitu je potrebné sterilnú miestnosť dôkladne dezinfikovať, kým opakované kontroly nebudú spĺňať požiadavky.
7. Pozrite si kapitolu (Metóda kontroly sterility) v časti „Metódy hygienickej kontroly liekov“ a „Štandardné prevádzkové postupy v Číne pre kontrolu liekov“.
8. Oddelenie distribúcie: Oddelenie riadenia kvality
Technické pokyny pre čistú miestnosť:
Po získaní sterilného prostredia a sterilných materiálov musíme udržiavať sterilný stav, aby sme mohli študovať konkrétny známy mikroorganizmus alebo využiť jeho funkcie.V opačnom prípade sa tam môžu ľahko primiešať rôzne mikroorganizmy zvonku. Fenomén miešania irelevantných mikroorganizmov zvonku sa v mikrobiológii nazýva kontaminujúce baktérie.Prevencia kontaminácie je kritickou technikou pri mikrobiologickej práci.Úplná sterilizácia na jednej strane a prevencia kontaminácie na strane druhej sú dva aspekty aseptickej techniky.Okrem toho musíme zabrániť tomu, aby skúmané mikroorganizmy, najmä patogénne alebo geneticky upravené mikroorganizmy, ktoré v prírode neexistujú, unikli z našich experimentálnych nádob do vonkajšieho prostredia.Na tieto účely v mikrobiológii existuje veľa opatrení.
Sterilná miestnosť je zvyčajne malá miestnosť špeciálne zriadená v mikrobiologickom laboratóriu.Dá sa postaviť z tabúľ a skla.Plocha by nemala byť príliš veľká, asi 4-5 metrov štvorcových, a výška by mala byť asi 2,5 metra.Mimo sterilnej miestnosti by mala byť vytvorená vyrovnávacia miestnosť.Dvere nárazníkovej miestnosti a dvere sterilnej miestnosti by nemali smerovať rovnakým smerom, aby sa zabránilo prúdeniu vzduchu vnášať rôzne baktérie.Sterilná miestnosť aj vyrovnávacia miestnosť musia byť vzduchotesné.Vnútorné vetracie zariadenia musia mať zariadenia na filtráciu vzduchu.Podlaha a steny sterilnej miestnosti musia byť hladké, ťažko sa na nich zachytávajú nečistoty a musia sa ľahko čistiť.Pracovná plocha by mala byť rovná.Sterilná miestnosť aj vyrovnávacia miestnosť sú vybavené ultrafialovým svetlom.Ultrafialové svetlá v sterilnej miestnosti sú vzdialené 1 meter od pracovnej plochy.Personál vstupujúci do sterilnej miestnosti by mal nosiť sterilizovaný odev a klobúky.
V súčasnosti sú sterilné miestnosti väčšinou v mikrobiologických továrňach, zatiaľ čo všeobecné laboratóriá používajú čisté lavice.Hlavnou funkciou čistej lavice je použitie zariadenia na laminárne prúdenie vzduchu na odstránenie rôznych drobných prachov vrátane mikroorganizmov na pracovnej ploche.Elektrické zariadenie umožňuje prechod vzduchu cez hepa filter a následne vstup na pracovnú plochu, takže pracovná plocha je vždy udržiavaná pod kontrolou prúdiaceho sterilného vzduchu.Okrem toho je na strane pri vonkajšej strane vysokorýchlostná vzduchová clona, ktorá zabraňuje vniknutiu vonkajšieho bakteriálneho vzduchu.
V miestach so sťaženými podmienkami možno namiesto čistej lavice použiť aj drevené sterilné boxy.Sterilný box má jednoduchú štruktúru a ľahko sa presúva.Na prednej strane boxu sú dva otvory, ktoré sú blokované push-pull dvierkami, keď nie sú v prevádzke.Počas prevádzky môžete natiahnuť ruky.Vrchná časť prednej časti je vybavená sklom pre uľahčenie vnútornej obsluhy.Vo vnútri boxu je ultrafialová lampa a cez malé bočné dvierka je možné vložiť náčinie a baktérie.
Aseptické operačné techniky v súčasnosti zohrávajú nielen kľúčovú úlohu v mikrobiologickom výskume a aplikáciách, ale sú tiež široko používané v mnohých biotechnológiách.Napríklad transgénna technológia, technológia monoklonálnych protilátok atď.
Čas odoslania: Mar-06-2024